Visando a substituição de inseticidas químicos, que apresentam vários efeitos negativos ao meio ambiente e ao homem pelo seu uso excessivo, começaram a surgir pesquisas na busca de novas alternativas de controle de insetos. O larvicida a base de Bacillus thuringiensis variedade israelensis (Bti) tem sido normalmente utilizado no mercado, substituindo os inseticidas químicos. O bacilo produz no momento de sua esporulação proteínas conhecidas como delta-endotoxinas, tóxicas para as larvas de mosquitos. O uso do Bti se mostra muito efetivo, porém não desprovido de falhas. Para que o efeito sob o controle dos insetos seja efetivo, é necessária a melhoria constante dos produtos no mercado. A adição de cafeína na formulação do bioinseticida Bti é uma alternativa interessante na busca de maior efetividade nos resultados de controle de mosquitos, pois estudos demonstram que esta substância altera a produção das esterases no organismo das larvas. Essas enzimas estão envolvidas em funções vitais do mosquito. No entanto é necessário conhecer os efeitos do produto formulado para o inseto alvo (dose letal - DL₅₀) como também sua concentração crítica de ecotoxicidade (CE_C) observando também os efeitos deste produto no ecossistema local. Neste trabalho, determinou-se a DL₅₀ e a CE_C do produto fermentado (processo semicontínuo com corte de 60%) formulado com diferentes quantidades de cafeína. Para os testes de DL₅₀ foram utilizadas larvas de Aedes albopictus seguindo metodologia proposta por Draft (1999). Para os testes de ecotoxicidade, os organismos bioindicadores Daphnia simillis e Euglena gracilis foram empregados utilizando metodologias definidas pela NBR12713 e por Häder (2009), respectivamente. As concentrações de cafeína utilizadas foram 5,10 e 15 mg/L. Com os resultados obtidos destas formulações percebeu-se uma diminuição do valor da DL₅₀ a medida que a concentração de cafeína aumentava, sendo o melhor valor alcançado com a formulação que continha 15mg/L de cafeína (DL₅₀ = 1,94 mg/L). A concentração crítica de ecotoxicidade alcançou valores na ordem de 0,01g/L para D. similis. Estes resultados mostram que mesmo sendo um produto altamente tóxico para larvas de mosquitos, o produto pode ser aplicado em rios e riachos sem comprometer o desenvolvimento de outras espécies. Os testes com E. gracilis ainda se encontram em fase de acabamento.