O glicerol é um sub produto da produção de biodiesel e com a política nacional de estimulo a adição de biodiesel nos combustíveis fósseis tem aumentado a presença dos seus subprodutos no mercado. Várias são as aplicações da glicerina, dentre elas seu uso como fonte de carbono no cultivo de microrganismos. O poli(3-hidroxibutirato) P(3HB), poliéster natural e biodegradável, é produzido por fermentação bacteriana. Objetivou-se neste trabalho avaliar o uso do glicerol purificado, como fonte de carbono adicional na produção de P(3HB). Para isso, foi avaliada a produção de P(3HB) cultivando-se Cupriavidus necator DSM 515 em frascos erlenmeyer aletados de 1000 mL com 300 mL de meio mineral, agitados (150 min-1¬) por 24 horas, utilizando um delineamento composto central rotacional 23 com três pontos centrais, totalizando 17 ensaios. As variáveis estudadas foram a concentração de glicerol no meio (variando de 0 a 30 g/L), a concentração de açúcar invertido (de 0 a 30 g/L) e a temperatura de cultivo (28 a 38°C). As amostras foram analisadas quanto ao crescimento celular, produção de P(3HB) e consumo de glicerol e açúcar invertido. A análise estatística aponta claramente que nas maiores concentrações de açúcar (15 a 30 g/L) e nas temperaturas mais elevadas (36 a 38 °C) tanto a produção de P(3HB) quanto o percentual de acúmulo do polímero na célula são maiores. Embora a concentração de glicerol no meio não seja estatisticamente significativo ao nível de significância estabelecido para esse teste (0,05) percebe-se um grande aumento na concentração de P(3HB) e principalmente no percentual de polímero acumulado na células quando o glicerol está presente no meio. Quando utiliza-se 15 g/L de glicerol o percentual de acúmulo de P(3HB) chega a mais de 70% e a produção do polímero é de 6,9 g/L, contra um acúmulo de 48% e produção de 5,3 g/L quando não tem glicerol no meio. Ampliação de escala será realizada em fermentador de 5 L para produção de filmes de P(3HB) e análise das propriedades físicas, mecânicas e seu potencial de degradação e citotoxicidade, visando a aplicação desse polímero na médica.