Polissacarídeos de Pleurotus vêm sendo estudados para a prevenção e o tratamento de câncer. Pesquisas têm sido realizadas visando aumentar a produção destes polissacarídeos, em meio líquido, por meio da alteração da concentração de nutrientes e das condições de cultivo. Contudo, existem poucos estudos sobre a influência do processo de cultivo sobre a produção de polissacarídeos por Pleurotus. Ainda, muitos trabalhos reportados na literatura validaram a atividade de substâncias bioativas de fungos do gênero Pleurotus após a indução tumoral. No entanto, poucos trabalhos objetivaram investigar a possível ação preventiva dessas substâncias sobre o desenvolvimento das neoplasias. Portanto, neste trabalho estudou-se a produção de polissacarídeos extracelulares (EPS), por Pleurotus djamor UNIVILLE 001, em processo semi-contínuo com corte de 50%, como também, estudou-se a atividade antitumoral de substâncias bioativas presentes na biomassa deslipidificada do Pleurotus djamor contra Sarcoma 180, em camundongos albinos Swiss machos, por meio de testes pós e pré/pós-indução tumoral. Os ensaios de cultivo submerso foram realizados em biorreator de mistura completa de 4 L, pH 3,0, temperatura 30ºC, taxa de aeração 0,25 L/min, velocidade de agitação 300 rpm e concentração inicial de glicose 40 g/L. Os cortes de 50% foram realizados quando a concentração de glicose atingia 20 g/L. Após 560 h de cultivo foram computados 7 tempos de residência. Os 3 primeiros apresentaram perfis similares para a produção de EPS, sendo a concentração média de 1,42 g/L. O quarto tempo de residência apresentou perfil diferente, pois observou-se degradação dos polissacarídeos. Os tempos subsequentes apresentaram concentração total de EPS de 0,73 g/L. Para a avaliação da atividade antitumoral, o tratamento pós-indução tumoral foi iniciado 24 horas após o implante tumoral e conduzido durante 10 dias, enquanto que o tratamento pré/pós-indução tumoral foi iniciado 10 dias antes da indução tumoral e mantido por 10 dias após a implantação do tumor. A administração da substância teste foi realizada por via intraperitoneal nas doses de 10, 30 e 50 mg/kg e a avaliação do desenvolvimento tumoral foi realizada 21 dias após a indução do tumor pela determinação do volume e da massa tumoral. Os resultados mostraram uma inibição tumoral média de 83,3% e 70% para os testes pré/pós- indução e pós-indução, respectivamente. A sobrevida dos animais tratados com 10 mg/kg da substância teste aumentou em 90%. O ensaio MTT revelou citotoxicidade na dose de 16 mg/mL.