O rápido crescimento na produção de biodiesel causou um excedente de glicerol o que levou a um decréscimo significativo no preço do glicerol bruto. Portanto, a conversão de glicerol em outros produtos é desejável. Glicerol tem sido empregado como substrato para obtenção de produtos de origem microbiana de alto valor agregado, tais como ácidos orgânicos, carotenóides, SCO (single cell oil), bem como em outros processos microbianos utilizando fungos, leveduras, algumas espécies de algas e bactérias. Com o objetivo de propor cultivos alternativos para uso do glicerol, passou-se a utilizar o micro-organismo K. marxianus para produção de lactase, enzima de elevado valor comercial. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar a produção de B-galactosidade por K. marxianus a partir de glicerol como substrato e verificar a capacidade de hidrólise da enzima em substratos como leite e soro de queijo. Células de K. marxianus foram ativadas à 30ºC e 150 min^-1 em YPL por 15h. Foram utilizados 10% de inóculo, contendo volume final de 150 mL, nos diferentes meios de cultura (YP e glicerol ou soro de queijo como substrato). As culturas foram incubadas a 30 oc, sob agitação fixa de 150 min^-1, por 24h. As amostras foram colhidas a cada 8h e processadas para determinação da biomassa e atividade enzimática. A biomassa foi medida por turbidimetria, no qual se mediu a absorbância a 600 nm e convertidos em concentração celular (g.L^-1) por meio de uma curva de calibração. Em seguida, as células foram lavadas com água destilada, onde o caldo fermentativo foi centrifugado sob refrigeração, a 5500 min^-1 por 10 min (4700 x g). Após a última lavagem, o sobrenadante foi descartado e o precipitado ressuspenso em água destilada de modo a obter uma concentração celular padrão. Posteriormente, romperam-se as células em moinho de bolas. A atividade enzimática foi determinada usando o método baseado na hidrólise ONPG, realizado a 30 oc e pH 7 por 1 min. A atividade enzimática foi medida pela leitura em espectofotômetro a 405 nm. Os resultados revelaram que, com a presença de glicerol, houve um aumento no crescimento celular comparado com o meio sem a presença de glicerol. As demais análises estão em andamento.