A infecção do trato urinário (ITU) é a segunda patologia mais comum na população, sendo mais prevalente no sexo feminino, mas também acomete pacientes do sexo masculino, principalmente quando associada à sonda vesical e doença prostática. Nas ITUs não complicadas a Escherichia coli é a bactéria responsável pela maioria das infecções, enquanto nas ITUs complicadas o espectro de bactérias envolvido é bem mais amplo, incluindo bactérias Gram positivas e Gram negativas. Na maioria dos casos, a prescrição antimicrobiana acontece antes do resultado da cultura, tomando como base os dados epidemiológicos. O objetivo do estudo foi avaliar a sensibilidade de Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae isoladas em urina frente à Fosfomicina. Foram analisadas 203 uroculturas positivas para E. coli e K. pneumoniae de pacientes provenientes da comunidade, do hospital e Pró-Rim, atendidos no Ghanem Laboratório de Análises Clínicas, em Joinville, Santa Catarina, durante o período de outubro de 2013 a outubro de 2014. Todas as urinas foram cultivadas em meio de ágar CLED (Biomerieux®) e a identificação no sistema em automação VITEK ® 2 Compact (Biomerieux®). A sensibilidade de norfloxacina (10¼g), sulfametoxazol+trimetoprim (25¼g), nitrofurantoína (300¼g), ciprofloxacino (5¼g) e fosfomicina 200 ¼g acrescido de 50 ¼g de glicose 6 fosfato, todos marca Oxoid® foram analisados por difusão em disco (Kirby-Bauer) em meio Müeller-Hinton (Biomerieux®) e a interpretação da Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI, 2014). Do total de 203 isolados de urina, 178 foram E. coli e 25 Klebsiella pneumoniae, sendo maioria de pacientes externos do sexo feminino. A fosfomicina e nitrofurantoína foram os antibióticos com maior atividade para E. coli, com sensibilidade 94,4%(168) e 87%(155), enquanto ambos, norfloxacina e ciprofloxacino apresentaram 70,8%(126) e, sulfametoxazol+trimetoprim teve menor atividade 69,1%(123). Já a Klebsiella pneumoniae teve sensibilidade a fosfomicina de 68% (17), norfloxacina, sulfametoxazol+trimetoprim e ciprofloxacina 64% (16) todos e, menor atividade foi nitrofurantoína com 28%(7). Quanto à produção de ESBL 5,4%(11) dos isolados produziram esta enzima, sendo 09 E. coli e 02 K. pneumoniae. Dentro destas, 01 E. coli e 02 K. pneumoniae foram resistentes a todos os antibióticos testados. Conclui-se que a fosfomicina é a melhor escolha terapêutica no tratamento de cistites não complicadas, mas estudos constantes da resistência bacteriana são imprescindíveis para escolha adequada da terapia empírica, pois o aparecimento destas espécies com resistência a fosfomicina limita mais o tratamento.