Introdução: A galactosemia clássica (tipo I) é uma doença genética causada pela deficiência na atividade da enzima galactose-1-fosfato uridiltransferase, a qual está envolvida no metabolismo da galactose. Objetivo: Investigamos os efeitos da infusão intracerebroventricular de galactose e a influência dos antioxidantes alfa-tocoferol e ácido ascórbico sobre parâmetros de estresse oxidativo e sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE) em hipocampo de ratos. Metodologia: Os animais foram divididos em: grupo 1 (naive) que não sofreu cirurgia; grupo 2 (sham) que sofreu cirurgia e recebeu administração intraperitoneal (i.p.) de salina e i.c.v. de salina; grupo 3 (galactose) que sofreu cirurgia e recebeu administração i.p. de salina e i.c.v. de galactose; grupo 4 (alfa-tocoferol + ácido ascórbico) que sofreu cirurgia e recebeu administração i.p. de antioxidantes e i.c.v. de salina e grupo 5 (galactose + alfa-tocoferol + ácido ascórbico) que sofreu cirurgia e recebeu administração i.p. de antioxidantes e i.c.v. de galactose. Os ratos (53 dias) foram pré-tratados durante 7 dias com uma injeção i.p. de salina ou ±-tocoferol (40mg/kg) e ácido ascórbico (100mg/kg). Doze horas após a última administração, receberam infusão i.c.v. de galactose (5 ¼L de solução 5,0 mM) ou salina e foram sacrificados por decaptação 1 hora após a administração. O hipocampo foi removido, homogeneizado e centrifugado. A atividade das enzimas antioxidantes CAT, SOD e GSH-Px , os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), conteúdo total de sulfidrilas e de carbonilas e a atividade da AChE foram determinadas pelos métodos de Aebi (1984), Marklund (1985), Wendel (1981), Ohkawa et al. (1979), Aksenov e Markesbery (2001), Reznick e Packer (1993) e Ellman et al. (1961), respectivamente. Os dados foram analisados pela ANOVA de uma via seguido pelo Teste Múltiplo de Duncan quando indicado. Resultados: Os resultados mostraram que a infusão intracerebral de galactose aumentou os níveis de TBA-RS (p<0,01) e a atividade da AChE (p<0,01) e diminuiu o conteúdo total de sulfidrilas (p<0,01), porém não alterou os demais parâmetros (p>0,05). O pré-tratamento com alfa-tocoferol e ácido ascórbico não alterou os parâmetros analisados, quando comparado ao grupo naive e sham, e foi capaz de prevenir o aumento do TBA-RS (p<0,01), a redução do conteúdo total de sulfidrilas (p<0,001) e o aumento na atividade da AChE (p<0,001). Conclusão: Os resultados sugerem que as alterações nos parâmetros de estresse oxidativo e na atividade da AChE são provavelmente mediadas pela geração de radicais livres, os quais são removidos pelos antioxidantes alfa-tocoferol e ácido ascórbico.