Resumo: Erva-doce ou anis (Pimpinella anisum) é uma espécie vegetal com aplicação medicinal, freqüentemente utilizada como condimento em Santa Catarina. Embora sejam poucos os estudos farmacológicos, a população utiliza a planta para prisão de ventre, dor de estômago, cólica intestinal, como antiespasmódico, e acredita-se que tem efeito carminativo, expectorante, tônico, estomacal, digestivo, regularizador das funções menstruais. Com o intuito de otimizar técnicas de micropropagação para sementes de P. anisum, foram avaliados métodos de assepsia para cultivo in vitro. Sementes de P. anisum adquiridas comercialmente foram submetidas a quatro testes de assepsia: “A”, desinfestação com álcool 70% por 2 segundos, imersão em solução de hipoclorito de sódio (NaOCl) a 0,5% por 15 minutos, lavagem por quatro vezes em água destilada e autoclavada, e imersão em cefalexina 500ppm por 10 minutos; “B” desinfestação com álcool 70% por 2 segundos, imersão hipoclorito de sódio 1% por 15 minutos, lavagem por quatro vezes em água destilada e autoclavada, e imersão em cefalexina 500ppm por 20 minutos; “C”, imersão em solução de hipoclorito de sódio (2,5%) e água (2:1), durante 20 minutos; “D”, imersão em solução de hipoclorito de sódio 2% durante 20 minutos e lavagem em água esterilizada e “E”, imersão em solução de 50 ml de água com duas gotas de detergente, para a primeira lavagem, enxágüe em água corrente, e imersão em álcool 70% por 40 segundos. Todos os testes foram realizados em câmara de segurança biológica e após cada tratamento de assepsia foram inoculadas 15 sementes em cada frasco do tipo “baby-food” com 20 ml meio de cultivo MS na concentração de 100% e ágar a 6,0g/L, sendo 4 repetições por tratamento. O teste de assepsia “D” proporcionou obtenção de 100% de sementes estéreis em um período de 30 dias. O hipoclorito de sódio é um potente agente microbiano devido à sua alta capacidade de penetrar na parede celular das bactérias e desativar uma enzima essencial à sobrevivência deste tipo de microorganismo. A imersão em NaOCl 2% por 20 minutos seguido de lavagem com água destilada esterilizada foi o agente anti-séptico mais eficaz para esterilização, devido ao grande potencial antimicrobiano, e a alta concentração da solução utilizada, bem como o tempo de imersão, que apresentando maior eficácia que os demais métodos, proporcionando a germinação de 100% de sementes estéreis de P. anisum.