A sepse é uma infecção generalizada associada a elevados índices de mortalidade em todo o mundo. São conhecidos alguns dos fatores responsáveis, como o diagnóstico tardio e a terapia imprecisa à base de antibióticos. Nas unidades de terapia intensiva (UTI) de Joinville, os agentes mais freqüentemente associados à sepse são Acinetobacter baumannii, Candida spp., Enterobacter spp., Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. O exame rotineiramente utilizado para a identificação desses agentes é a hemocultura com emprego de meios de cultivo seletivos. No entanto, a demora (24 a 72 horas) em produzir resultados confiáveis não favorece a atual recomendação de iniciar-se a terapia medicamentosa na primeira hora após o diagnóstico clínico. Neste sentido, os testes moleculares são geralmente mais rápidos e precisos. Desta forma, o desenvolvimento de metodologias alternativas empregando ferramentas moleculares poderia auxiliar na obtenção de resultados laboratoriais em menor espaço de tempo, possibilitando uma intervenção clínica e terapêutica com maiores chances de sucesso. O método a ser desenvolvido será baseado na técnica PCR (Polymerase Chain Reaction), que visa a amplificar segmentos específicos de DNA presentes mesmo em diminutas quantidades, através de ciclos de tempos e temperaturas pré-estabelecidos. Será formatado de forma que numa única reação seja possível a detecção simultânea dos microrganismos investigados (Multiplex PCR). Paralelamente à padronização da metodologia molecular, as amostras de sangue empregadas também serão analisadas via hemocultura convencional, para fins de comparação entre os dois métodos. O DNA total presente em cada amostra será extraído e purificado empregando-se o método Fenol-Clorofórmio. A PCR será realizada com iniciadores (primers) específicos para cada agente investigado, em termociclador MJ PTC100. Os produtos de amplificação serão resolvidos via eletroforese em gel de agarose a 1% e, após coloração com brometo de etídeo, visualizados com exposição à luz ultravioleta. A identificação do(s) agente(s) será realizada correlacionando-se com o tamanho planejado de amplicon de cada microrganismo avaliado, obtido com o emprego de cepas padrão. Atualmente, encontra-se em andamento o planejamento do sistema de amplificação. Dez seqüências codificantes para a fração 23S (agentes bacterianos) ou 18S (Candida) foram obtidas do GenBank, sendo a seguir alinhadas e transformadas em seqüências consensos utilizando-se o programa BioEdit. Alguns programas de acesso livre para desenho de primers foram testados (MuPex, FastPCR, Primer3) e descartados por não garantirem a exclusividade de reconhecimento necessária. Outros programas (Vector NTI, Visual OMP) estão sendo testados no momento.