Cogumelos do gênero Pleurotus são reconhecidos pelas suas propriedades nutricionais e medicinais. As propriedades medicinais estão, na maioria das vezes, relacionadas à sua composição em polissacarídeos constituintes da parece celular, tanto dos corpos frutíferos como do micélio. A extração aquosa destes polissacarídeos gera uma biomassa micelial residual que pode conter os ácidos graxos insaturados de alto valor nutricional comunmente presentes na composição dos cogumelos cometíveis. Este trabalho visa quantificar e caracterizar os ácidos graxos produzidos na biomassa micelial de Pleurotus ostreatus DSM 1833, cultivado em meio alternativo contendo 0,5% de óleo de soja, tendo em vista a utilização desta biomassa como alimento funcional. Os lipídeos foram extraídos da biomassa com éter etílico e submetidos a metilação para serem analisados por CG/MS. Os espectros de massa gerados por cada éster formado da reação de metilação foram comparados com a biblioteca do equipamento. Os lipídeos obtidos da extração foram convertidos em ésteres, sendo que a amostra sem extração de polissacarídeos apresentou 43,17% em área total de ácido linoléico metil éster, enquanto a amostra com extração dos polissacarídeos não apresentou este éster. Observou-se, também, que a soma das áreas totais dos ésteres foi maior para a amostra sem extração dos polissacarídeos, sugerindo numa maior converção em éster e sua composição foi similar as dos lipídeos obtidos de óleos vegetais os quais são utilizados na produção de Biodiesel, embora a quantidade de lipídeo gerado seja muito baixa para tornar o processo viável.