Fungos são, reconhecidamente, fonte de várias substâncias bioativas e, portanto, vêm sendo cada vez mais estudados. Mais especificamente, polissacarídeos produzidos por fungos têm despertado o interesse de muitos cientistas. Fungos do gênero Pleurotus tem capacidade de modular o sistema imunológico, atividade hipoglicêmica e antitrombótica, capacidade de diminuir a pressão arterial e o colesterol sangüíneo, possuindo também ação antitumoral, antiinflamatória e antimicrobiana. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo, avaliar o efeito da formulação do meio de cultivo sobre a concentração de biomassa, a concentração de polissacarídeos extracelulares e do fator de conversão de substrato em polissacarídeos extracelulares (Y_E/S), no cultivo de Pleurotus sajor-caju, em frascos agitados. Para tanto, foi utilizado um planejamento fatorial (2³) avaliando-se a influência da concentração inicial de (NH₄)₂SO₄, nos níveis 2,5 e 5,0 g/L, de extrato de levedura, nos níveis 1,0 e 2,0 g/L e de peptona, nos níveis 0,5 e 1,0 g/L. O experimento que apresentou menor concentração de biomassa (3,3 g de massa seca/L), bem como maior concentração de polissacarídeos extracelulares (4,65 g/L) e fator de conversão Y_E/S (0,639 g/g) foi o que utilizou as menores concentrações de (NH₄)₂SO₄, de extrato de levedura e peptona.