A política nacional de estimulo a adição de biodiesel nos combustíveis fósseis tem levado a um aumento do seu subproduto no mercado. O volume de glicerol em 2013 excederá 250 mil ton, sendo que o mercado brasileiro consome 40 mil ton/ano. Várias são as aplicações do glicerol, dentre elas seu uso como fonte de carbono no cultivo de microrganismos. O poli(3-hidroxibutirato) P(3HB), poliéster natural e biodegradável, é produzido por fermentação bacteriana podendo ser acumulado intracelularmente como fonte de carbono mediante condições controladas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi utilizar o glicerol, tanto o bruto (glicerato) como o purificado, como fonte de carbono adicional na produção de P(3HB). Cultivou-se Cupriavidus necator em erlenmeyer de 500 mL contendo 150 mL de meio mineral utilizando glicerato ou glicerol (3 g/L) como fonte de carbono e meio mineral e açúcar invertido como fonte de carbono (30 g/L), acrescidos de glicerato ou glicerol (3 g/L) como co-substrato, a 30ºC e 150 min^-1 por 24 horas. As amostras foram avaliadas quanto ao crescimento celular, produção de P(3HB) e consumo de glicerol/glicerato e açúcar invertido. Os resultados revelaram que nos meios onde glicerato e glicerol foram utilizados como fonte de carbono não houve crescimento celular significativo e consequentemente também não houve produção de P(3HB). Nos experimentos onde glicerato e glicerol foram utilizados como co-substrato houve crescimento celular de 5,9 e 6,2 g/L, e acúmulo de P(3HB) de 44,9 e 57,1 % de P(3HB), respectivamente, resultados semelhantes ao meio controle, indicando que tanto o glicerol bruto quanto o purificado podem ser utilizados como co-substrato, pois não possuem inibidores do crescimento celular.