A lactose é um dissacarídeo constituído de glicose e galactose. A B-galactosidase, conhecida como lactase, é uma enzima intracelular que catalisa esse açúcar resultando em seus monossacarídeos constituintes. Sua importância industrial está na produção de alimentos com baixos teores de lactose, ideal para consumidores intolerantes à lactose. Com uso de processos fermentativos para a obtenção de enzimas, tem surgido estudos por sistemas eficientes para recuperação de materiais intracelulares. Dentre as técnicas, pode-se citar o ultrassom, no qual ocorre o fenômeno de cavitação, o bead mill, que provoca o cisalhamento da membrana celular e a eletroporação, que promove a permeação da membrana celular. Considerando que as enzimas são sensíveis às variações de temperatura e pH, é importante verificar como o método de extração interfere nas características da enzima. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as técnicas de ultrassom, moinho de bolas e eletroporação, para a extração de B-galactosidase , bem como verificar a estabilidade da enzima com o tempo, temperatura e pH e o pH e temperatura ótimos para sua atuação. K. marxianus foi cultivado à 30ºC e 150 min1 em YEP Lactose. Após, foram aplicados pulsos contínuos com campos variando entre 100 e 400 kV/m, com estímulo variando entre 2 e 10 ms e, em paralelo, submetidas às técnicas de extração em diferentes tempos de ultrassonificação (10, 20, 30 e 40 min) com e sem pérolas de vidro e ultrassom seguido de moinho de bolas. O extrato enzimático obtido foi caracterizado quanto à temperatura ótima (30,37,45,55,60 e 70º C) e pH ótimo (2,5, 3, 3,5, 4,5, 5,5, 6, 7 e 8). Os resultados revelaram que aplicações crescentes do campo magnético de 100 kV/m a 400 kV/m, proporcionaram um aumento de cerca de 10x na atividade enzimática. No entanto, não foi encontrada atividade enzimática no sobrenadante no intervalo de tempo de estímulo e intensidade do campo testado. A extração por ultrassonificação sem a presença das pérolas de vidro não proporcionou rompimento celular, evidenciado pela ausência de atividade enzimática nestas condições. A melhor técnica de extração foi ultrassom (40 min) seguido de moinho de bolas, que aumentou a extração da enzima em 20% em relação a extração apenas com moinho de bolas. Nestas condições, a atividade ótima da enzima foi observada na temperatura de 37 ºC e pH 7. Com o uso da técnica de extração utilizando somente o moinho de bolas, a enzima perdeu 32% de sua atividade.