A enzima ²-(1’3) glucano sintase é responsável pela produção de polissacarídeos ²-(1’3) glucanos que estão presentes na parede celular de fungos e são conhecidos pelas inúmeras atividades biológicas, tais como antitumoral, imunomodulatória, prebiótica, anti-inflamatória, dentre outras. A obtenção destas biomoléculas com atividade medicinal desafia a Biotecnologia para desenvolvimento de tecnologias que garantam bons rendimentos do processo. Uma das formas de viabilizar economicamente alguns processos biotecnológicos é o melhoramento genético de microrganismos. Com o avanço das técnicas de Biologia Molecular é possível montar sequências lineares para deleção, troca de promotor, adição de proteínas tag ou genes para que possam ser diretamente usados na transformação de fungos. A troca do promotor natural de uma proteína de interesse pode melhorar sua expressão e consequentemente aumentar a quantidade de produto de interesse. Desta forma, a busca por metodologias rápidas e simplificadas de fusionamento de DNA tem auxiliado no progresso da biologia sintética. Este trabalho teve por objetivo fusionar 6 fragmentos de DNA por meio da adaptação do método Circular Polymerase Extension Cloning (CPEC), visando a obtenção de um cassete de expressão composto sequencialmente pela porção não codificante da glucano sintase (GLS), promotor da gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, duas porções codificantes da GLS, marcador de resistência da higromicina e porção terminadora da GLS. A reação foi conduzida com quantidades equimolares dos 6 fragmentos de DNA, 10 µL de tampão Q5, 2µL de dNTP (10 mM), 1 µL de Q5 High-Fidelity DNA Polymerase 2U/ µL (NEB, Biolabs), completando-se o volume para 50 µL com água. A concentração de DNA empregada foi de 0,05 pmol para cada fragmento. As condições de termociclagem seguiram uma desnaturação inicial a 98°C por 30 segundos, posteriormente 5, 10 ou 20 ciclos de 98°C por 10 segundos, anelamento a 55°C por 30 segundos, extensão a 72°C com tempo variando de acordo com o tamanho do maior fragmento (30s/kb) e extensão final por 5 min. Os resultados comprovam boa eficiência do método CPEC adaptado, o qual permitiu fusionar 6 fragmentos previamente purificados por extração em gel de agarose, após uma sequência de 20 ciclos de anelamento-extensão sem a presença de qualquer primer. Confirmações posteriores com primers internos e externos demonstram a eficiência do fusionamento via adaptação do CPEC numa única etapa.