No presente trabalho avaliou-se a obtenção e caracterização de películas de celulose bacteriana (CB) obtidas por cultivo de Gluconacetobacter hansenii ATCC 23769, recentemente denominada Komagataeibacter, utilizando manitol, glicose, frutose, lactose, glicerol, inulina e sacarose como fontes alternativas de carbono, e milhocina e Prodex Lac® como fontes de nitrogênio. A formação de membrana gelatinosa de CB foi acompanhada no decorrer de 12 dias, sob condição estática e temperatura de 30 ºC, com retirada da membrana formada a cada 2 dias para verificação do peso. Após purificação as membranas foram secas e caracterizadas por TGA, FTIR e MEV. As maiores concentrações de CB foram encontradas no meio de cultura contendo como fonte de nitrogênio o Prodex Lac®. Dentre os açúcares, frutose e manitol apresentaram os melhores resultados. As análises de TGA indicam que todas as membranas possuem comportamento térmico similar e os resultados de FTIR mostram que quimicamente independente da forma de obtenção, as amostras são equivalentes com as estruturas citadas em literatura. Comparando os ensaios em cultivo agitado e cultivo estático, os resultados mostram que o cultivo agitado permite obter o dobro da massa da membrana, no entanto o aspecto é uma massa única cocóide.